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技術支持

上海遠慕生物幫您解決-免疫組化遇到的問題

更新時間：2016-09-26 點擊次數：2174次

上海遠慕生物幫您解決-免疫組化遇到的問題

1、染色過強

原因	解決辦法
抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長	降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時間：室溫1小時或4℃過ye
孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃	一般室溫20-28℃
DAB顯色時間過長或DAB濃度過高	顯色時間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準

2、非特異性背景染色

原因	解決辦法
操作過程中沖洗不充分	每步沖洗3×5
組織中含過氧化物酶未阻斷	可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長
組織中含內源性生物素	正常非免疫動物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分	延長血清蛋白封閉時間

3、染色弱

原因	解決辦法
抗體濃度過低，孵育時間過短	提高抗體濃度，孵育時間不能少于60分鐘
試劑超過有效使用期	及時更換試劑
操作中，滴加試劑時緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋	每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥）
室溫太低，低于15℃	若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱過ye）
蛋白封閉過度	封閉時間不要超過10分鐘

4、染色陰性

原因	解決辦法
操作步驟錯誤	重新試驗，設立陽性對照
組織中無抗原	設立陽性對照片，以驗證實驗結果
一抗與二抗種屬連接錯誤	仔細確定一抗與二抗種屬無誤

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