植物組織樣本的前處理方法 @遠慕技術

植物DNA的提取和純化是植物基因工程研究的基礎操作。實施分子標記、基因圖譜、基因指紋圖譜、基因文庫構建、遺傳多態性分析、DNA重組、RAPD（隨機引物多態性DNA）、RFLP（限制性酶多態性）、基因分離及遺傳轉化和鑒定等都以提取DNA為前提。

目前，對從植物組織中提取DNA方法的要求是：簡便、有效、快捷以及經濟。與動物組織相比，植物組織含有較多的多糖和其他次生代謝產物（酚、酯、萜、色素等），這給高質量的DNA提取帶來較多的困難。尤其是多糖成分是影響DNA純度-常見的問題。如何做到既去除這些污染物又能相對保持高的產量，并且能簡捷有效地提純，一直是植物生物技術研究者探索的問題。

對于普通的植物（低酚、低酯、低糖等）如：水稻、白菜、莧菜、南瓜、黃瓜、西紅柿、上海青、菠菜、筍瓜、冬瓜、蓮藕、山藥、竹筍等；我們可以選用普通植物DNA提取試劑盒（磁珠法）試劑

對于多糖、多酚類植物（香蕉、西瓜、蘋果、梨等果肉，紅薯、馬鈴薯等塊莖，棉花、月季、枇杷、益母草、夏枯草等人參、曼陀羅、向天果、射干、桔梗、滿山紅、金雞納霜等藥用植物）可以選用多酚植物DNA提取試劑盒（磁珠法）試劑，針對類似的植物我們經過長期的優化，可以得到較好的實驗結果。

以葉片為例，葉片需先剪碎成小塊，以便放入1.5ml離心管。-佳樣本的長度應在1cm 以下。重量不超過250mg，推薦使用50mg，如果是植物種子粉末可以使用10mg-20mg粉末即可。

一、勻漿介質

一般采用 0.05 mol/L Tris-HCl，pH 7.4 磷酸鹽緩沖液（PBS），客戶可根據樣本及測定方針的狀況自行設定濃度，目的是堅持樣本的等滲環境。

二、組織勻漿的制備

1、取組織塊（0.2g～0.5g）可到 5～10mg 在嚴寒的 PBS 中漂洗，濾紙拭干，稱重，放入 5ml 的勻漿管中。

2、按重量 (g)：體積 (ml)=1:4 的比例參與 4 倍體積的勻漿介質于勻漿管中，冰水浴條件下，用眼科小剪趕快剪碎組織塊。  

3、勻漿的方法：手工勻漿，機器勻漿。

① 手工勻漿：左手持勻漿管將下端刺進盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿筆直刺進套管中，上下轉動研磨數十次（6～8 分鐘），充沛研碎，制成 20% 的勻漿液。

② 機器勻漿：用組織搗碎機 10000～15000 轉 / 分 上下研磨制成 20% 組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備（勻漿時間 10 秒 / 次，空隙 30 秒，接連 3～5 次，在冰水中進行，可適當延伸勻漿時間），

4、將制備好的 20% 勻漿液用一般離心機或低溫低速離心機 4000 轉 / 分左右，離心 10～15 分鐘，取上清液進行測定.

三、樣本保存

植物組織樣本暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中心如不重復凍融，-20 ℃ 以下可保存三個月，-70 ℃ 以下可保存六個月。 制備好的勻漿液主張不要凍存，當天進行測定，如放置時間過長相關酶活會有所下降，部分方針 4 ℃ 可存放 3～5 天（如 SOD 要存放 2～3 天，MDA 可存放 3～5天，總蛋白測定可存 5～7 天）。