葡聚糖凝膠的方法分類及儲運特性

　　方法分類

　　1.乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干；

　　2.無鹽水浸泡：室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然后；

　　3.鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗至中性；

　　4.將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，并避免柱內產生氣泡或斷層；

　　5.上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；

　　6.凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調整；脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可；

　　7.洗脫方法：可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；

　　8.在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

　　儲運特性

　　1、未使用，室溫保存即可。

　　2、使用后保存方法如下：凝膠層析的載體不會與被分離的物質發生任何作用，因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次后，由于床體積變小，流動速率降低或雜質污染等原因，使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理，其方法是:先用水反復進行逆向沖洗，再用緩沖溶液平衡，即可進行下一次分離。對使用過的凝膠，若短時間保存，只要反復洗滌除去蛋白質等雜質，加入適量防腐劑即可；

　　3、若長期保存，則需將凝膠從柱中取出，進行洗滌、脫水和干燥等處理后，裝瓶保存。