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流式抗體(熒光抗體)細胞染色步驟與注意
更新時間:2022-10-08 點擊次數:818次
染色緩沖液(BSA)的配制:
PBS含有1% FBS和0.09% NaN3,置于冰上或4度冰箱備用。
準備單細胞懸液:淋巴組織、骨髓、血液或培養的細胞。
用冰染色緩沖液洗細胞2次,離心細胞,用冰染色緩沖液重懸細胞,使終濃度為2×107細胞/ml。
各取50ul(106細胞)細胞懸液到2個圓底的Ep管中。
根據抗體說明書在其中1個Ep管中加入合適的抗體量,另外1個加入同型對照抗體,冰上避光孵育20分鐘(建議每5分鐘輕輕混勻,以免細胞沉積)。根據熒光抗體的親和力適當延長染色時間。
用1ml染色緩沖液洗2次去除未結合的抗體,300×g離心5分鐘,每次離心后小心吸取上清。
用適量染色緩沖液(如500ul)重懸細胞。
流式細胞儀分析染色結果(不超過4小時)。如果暫時無法檢測,也可以將染色后的細胞用4%多聚甲醛固定后,避光儲存在4度。固定后的細胞可以保存zui多一個星期。
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