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實驗中稀釋血清樣本的原因及方法
更新時間:2022-11-07 點擊次數:4394次
在ELISA實驗過程中,樣本稀釋是一個重要的步驟,為何樣本都需要稀釋呢?今天就先向大家著重介紹一下血清樣本稀釋的原因以及稀釋的方法。
一、稀釋血清的原因:
1、比賽按捺對比明顯,應稀釋比賽物。
2、以下降非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。
血清稀釋用一般的PBS即可,可加1%的BSA,能有用下降ELISA本底,血清的稀釋倍數一定要事前確認,但也不必一點點,做一個預實驗即可,挑選OD在1.0左右的稀釋倍數,即ELISA中陰性孔OD在1.0,這么做出來的曲線對比會比較靈敏。
二、稀釋血清的方法:
1、先把蛋白稀釋一定的倍數,比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確認一個參數),將抗原進行一系列稀釋包被反應等等。
2、再用一定稀釋度的陽性參閱血清和陰性參閱血清進行孵育后洗刷,再加酶結合物進行反應,經孵育洗刷后,加底物溶液顯色,停止反應后分別測定O.D值,挑選O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為最適包被濃度。一般總是要挑選那個O.D值稍大于1.0,而不挑選小于1.0的抗原濃度。陰性參閱血清O.D值要求<0.1-0.2。就是要求陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值有明顯差別。
以上就是ELISA實驗中稀釋血清樣本的原因及方法,大家在實驗過程中一定要多多注意,否則可能會影響實驗的最終結果。
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