【遠慕技術】BAS-酶聯免疫吸附試驗

BAS-酶聯免疫吸附試驗(BAS-ELISA)是ELISA的一種改良技術，將BAS，即生物素-親和素系統(biotin avidin system)引入ELISA，大大提高了ELISA的靈敏度。

(一) 親和素和生物素

1. 親和素(avidin) 給動物飼喂大量卵白蛋白后，可引起生物素缺乏癥，此后證明，卵白蛋白中存在一種對生物素有異常親和力的堿性蛋白，稱之為抗生物素蛋白或卵白素，現今均稱為親和素。因為親和素存在于卵白蛋白中，故可從雞蛋白清中提取親和素，它是由四個相同的亞基組成的堿性糖蛋白，分子量6.6～6.8萬，等電點為10.5，由于每個亞基都可以結合一個生物素分子，所以親和素呈四價反應性，在血清學反應中，可以產生新的放大作用；現規定凡結合1μg生物素所需親和素的量，即為親和素的一個活性單位，1mg純親和素約含13～15個活性單位。

2. 生物素(biotin) 即維生素H，主要存在于卵黃、腎、肝等組織中，除可提取外，也能人工合成，另外在動植物體內也廣泛存在，系結構簡單的小分子物質，分子量244.31，它不能直接與親和素結合，需活化后，產生生物素衍生物(即生物素酰羥基丁二酰亞胺，HS，為白色結晶，熔點200～202℃)才能與親和素結合。另外，它還能高比度地偶聯抗體等反應物質和酶等標記材料，分別制成生物素化抗體和生物素化酶等，在免疫反應中起到一級穩定的放大作用。

因為親和素對生物素有ji強的特異性結合作用，且具有多價性，據此，可以建立生物素化抗體-親和素-生物素化酶復合物酶聯免疫吸附試驗檢測體系，利用親和素為中介，一端通過生物素化抗體聯接檢測抗原的免疫反應系統，另一端通過生物素化酶等連接標記顯示系統，可產生多極放大作用，從而明顯地提高了檢測的特異性和敏感性。

(二) BAS-ELISA的技術類型 該檢測系統可分為以下兩類：

1. BAB法 (biotin-avidin-biotin) 即以游離的親和素分別橋聯生物素化抗體和生物素化酶的檢測方法。目前最chang用的是本法的改良法，即預先使親和素與生物素化酶形成復合物(avidin-biotin-peroxidase complex, ABC)，再使其與生物素化抗體反應，因而叫做ABC法，此法既減少了反應步驟，又因ABC網格結構可網絡數量極為可觀的酶分子，從而使BAS的靈敏度又得到了進一步的提高。

2. BA法 (Ab-biotin-avidin-HRP)即直接以酶標親和素聯接生物素化抗體，檢測抗原的方法。

為簡化反應程序，廠家試制了酶聯BAS試劑，連接被檢測的免疫反應系統是生物素化抗體，即生物素化抗抗體-羊抗兔(SARG-b)和兔抗小鼠(RAMG-b)及一種生物素化抗體-生物素化馬抗人AFp。較常用的生物素化酶是生物素化辣根過氧化物酶(bHRP)。

(三) BAS-ELISA在檢測工作中的應用 該技術應用最多的一個方面是檢測可溶性抗原如細菌和病毒等，以及它們的相應抗體，現舉例如下：

1. 細菌性抗原的檢測 Yolken等采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測流感桿菌b型、肺炎球菌和鏈球菌抗原等，先用相應抗體包被酶標板，然后分別加入細菌培養上清液、生物素化抗體和親和素與生物素化酶復合物來實施反應；本法檢測的靈敏度比常規ELISA和熒光抗體法高4～16倍。

2. 病毒性抗原的檢測病毒性抗原也可用雙抗體夾心法檢測，如檢出糞便中的輪狀病毒，可用抗體包板，再相繼加入待檢標本、生物素化抗體、親和素和3H標記的生物素，然后作放射免疫測定。國內已用此法檢測單純皰疹病毒、巨細胞病毒、肺炎病毒及其相應抗體。