培養基移種操作方法

一、斜面培養基移種技術

(1)材料

瓊脂斜面培養基

經分離培養的平板培養物。

(2)方法

①在瓊脂斜面培養基試管上部標明移種的菌名(或編號)、接種日期、接種者的組別及代號。

②左手持長有細菌的平板底，右手持接種環。接種環在火焰上滅菌冷卻后，沾取平板劃線上發育良好的孤立菌落。把平板放回原處，立即用此手取斜面培養基斜持，用右手小指與手掌夾持棉塞，輕輕轉動后撥出棉塞，管口通過火焰滅菌。

③將已沾菌的接種環伸入斜面培養基的管底部的凝固水，沿斜面培養基的表面從底向上劃一直線，然后再從底部向上劃連續曲折線；也可不劃直線只劃曲折線。取出接種環，管口通過火焰滅菌，塞好棉塞，放試管架上，接種環火焰滅菌后放下。

向斜面培養基上移種的細菌如果是生長在斜面培養基上的，或是生長在液體培養基中的，則用左手同時斜持菌種管和斜面培養基兩個管，右手無名指、小指手掌同時拔起夾持二個棉塞。管口及接種環先經火焰滅菌后，從菌種管取菌立即移種到斜面上，塞好棉塞，接種環火焰滅菌后放下。然后將斜面培養基放37℃恒溫箱中培養24h。結果斜面表面形成菌苔。

二、液體培養基移種技術

用于純種細菌的增菌及觀察細菌在液體環境中的生長特征(混濁生長，表面生長或沉淀生長)

(1)材料

肉湯培養基

斜面培養物(大腸埃希菌、化膿性鏈球菌、枯草芽胞桿菌)

(2)方法

①取接種環在火焰上灼燒滅菌、冷卻。

②以“雙管移植法"左手持細菌斜面培養物和肉湯培養基兩支試管，右手持接種環，按無菌操作法取少量細菌，將沾菌的接種環在斜傾的接近液面的管壁上輕輕涂抹研勻，試管直立使沾附在管壁上的細菌沒入液體中，接種后放37℃恒溫箱中培養。

(3)結果

①渾濁生長大腸埃希菌菌液呈均勻混濁，管底有少量沉淀。

②沉淀生長化膿性鏈球菌菌液管底有沉淀，菌液無明顯渾濁。

③菌膜生長枯草芽胞桿菌菌液表面形成膜狀物。

三、半固體培養基移種技術

用于保存菌種及間接檢查細菌有無動力。

(1)材料

半固體培養基。

細菌斜面培養物。

(2)方法

①將接種針經火焰滅菌冷卻后，從斜面培養物表面沾取細菌。

②用無菌法穿刺接種，將接種針刺入半固體培養基正中央，深度達距管底0.5cm處停止，然后循原路退出。注意在刺入及拔出時要保持接種針不向穿刺線外擺動。

③試管口通過火焰滅菌，塞上棉塞。接種針經火焰滅菌。培養物放37℃恒溫箱中培養。

(3)結果：有動力的細菌呈擴散生長，無動力的細菌沿穿刺線生長。