配制培養基的詳細步驟

配制培養基的詳細步驟

1、配制溶液

向容器內加入所需水量的一部分，按照培養基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶bai解，最后補足所需水分。對蛋白胨、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發的水分，應在全部原料溶解后加水補足。

配制固體培養基時，先將上述已配好的液體培養基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續加熱至wan全融化。并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

2、調節pH值

用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。

3、過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時，最好折疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。

4、分裝

已過濾的培養基應進行分裝。如果要制作斜面培養基，須將培養基分裝于試管中。如果要制作平板培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝于錐形瓶內。

分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養基。分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。

裝入試管的培養基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養基時，每只15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度），如制作深層培養基，每只20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每只錐形瓶裝入的培養基，一般以其容積的一半為宜。

5、加棉塞

分裝完畢后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應采用普通新鮮、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。

制作棉塞時，要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞。

棉塞作成后，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼內壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內，上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，準備滅菌。

6、制作斜面培養基和平板培養基

培養基滅菌后，如制作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。