如何祛除細胞上的支原體污染？

細胞培養怕支原體污染，但有一些被污染的細胞不能被丟棄時該怎么辦？接下來一起來了解一下吧

如何祛除細胞上的支原體污染？

據研究表明，約98％的支原體存在于細胞表面和細胞間隙。支原體直徑約180~350nm，比細胞小很多，經低速離心與細胞分離。通過反復懸浮沖洗、離心，加上使用我們的Zell Shield，即可在細胞培養四代以內有效地祛除支原體。

什么是Zell Shield？

Zell Shield是一種鏈青霉素類復合抗生素，對細胞影響很小，可以有效抑制細胞培養中的支原體、細菌、霉菌、真菌等微生物增殖。普通的鏈霉素、青霉素對支原體沒有效果。

具體是怎么操作呢？

1.首先把被支原體污染的細胞消化下來，放入離心管離心，棄上清。再加入干凈的PBS懸浮沖洗細胞、低速離心（300~500r/min）、棄上清，反復三次。這樣可祛除細胞表面60％~70％的支原體，支原體還剩約30％~40％.

2.細胞加入含1％Zell Shield的新鮮培養基，傳代培養。這時因培養基中Zell Shield的抑制作用細胞培養過程中，雖然細胞增殖，但殘留的支原體無法增殖。細胞需再次傳代時，把第二代細胞消化下來，離心，棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，反復三次，這時，細胞上殘留的支原體大約已剩余為初污染量的10％左右。

3.細胞加入含1％Zell Shield?的新鮮培養基，傳代培養。需再次傳代時把第三代細胞消化下來，離心，棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，反復三次，可再次祛除60％~70％的殘余支原體，通過沖洗、抑制、換液等操作，細胞中支原體的殘留污染量大約只剩3％左右。

4.細胞加入含1％Zell Shield?的新鮮培養基，傳代培養。

需再次傳代時把第四代細胞消化下來，離心，棄上清。加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，反復三次，可再次祛除60％~70％的支原體，此時，支原體殘留量大約已低于1％.支原體的增殖亦有密度要求，用Zell Shield處理過四代的細胞，即便撤掉Zell Shield，只要保證沒有新的支原體人為再次帶入，原有支原體也無法再增殖，隨著傳代，換液，支原體的老化、死亡，細胞中的支原體污染基本就徹di解決了。

敲黑板，劃重點啦！

1.每次傳代時，重復三次對細胞懸浮沖洗步驟非常重要，操作要正確、規范，以達-佳效果！

2.在培養基中加入1％Zell Shield?抑制支原體增殖！

3.使用安全的血清、培養基等試劑，不再有新的支原體加入！

做到以上三點即可確保祛除支原體污染。

Zell Shield工作原理是什么？

支原體祛除劑Zell Shield（培養基用）是一種即用型鏈青霉素類的復合抗生素，在培養基中1%的濃度通過阻止原核生物DNA及蛋白的合成，抑制細胞培養中遇到的細菌、真菌、霉菌增殖，更可以有效、精-確地抑制支原體增殖，且對細胞基本安全。

品名：支原體祛除劑Zell Shield（培養基用）

供應商：遠慕生物

規格：50mL/瓶

儲存溫度：-18℃

使用注意事項：實驗室初次使用，注意分裝，分裝后的小包裝Zell Shield?仍-20℃避光冷凍保存，現配現用。