大腸桿菌DH5α化學感受態細胞使用說明書

中文名稱：大腸桿菌DH5α化學感受態細胞
英文名稱：E.coli DH5α Chemical Competent Cell
產品規格：0.1mL*10

本產品是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。DH5α是一種常用于質?？寺〉木?，其φ80lacZΔM15基因產物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測，轉化效率不低于107，適用于高效的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩定復制。

本菌種來源于Hoffman-Berling 1100菌種。

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入800μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，200rpm(小于225rpm)振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。

注意事項：
1、涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。