細胞培養中常見的真菌污染源分析

??培養基變渾濁的原因可能有如下幾點：
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??1、細胞存在污染，污染早期可以見到細胞生長；
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??2、不排除傳代時細胞密度過大，或者操作不當導致多數細胞不貼壁，大量細胞漂浮。
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??3、細胞破碎。
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??細胞培養中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染.他們在細胞培養中污染的特點如下：
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??1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯.
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??2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一.而且它不能用過濾的辦法除去.支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死si去.
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??3、黑膠蟲：可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的.常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象.對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理.
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??4、真菌：一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物.真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了.
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??5、原蟲：培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮.他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養.這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,最終形成惡性循環.
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??6.病毒：組織細胞培養過程中,如果沒有除去潛在的病毒,就會產生病毒污染.目前,從原代猴腎細胞的培養中已發現不少于20種血清性病毒.盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產疫苗是不安全的.因此,潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題 。
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??7、非同種細胞污染 ：即是細胞交叉污染,由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染.目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效.非細胞培養物所造成的化學成分的污染也偶有發生,大多是由于細胞培養所需物品清洗消毒不徹di而帶入一些有毒化學物質所致.