葡聚糖凝膠 G-15 用途
葡聚糖凝膠 G-15 用途,使用方法,規格等咨訊由上海遠慕生物提供介紹,別名:交聯葡聚糖凝膠G-15、交聯右旋糖酐凝膠G-15,規格:25G,100G,500G,干顆粒直徑:40~120um,分子量分級范圍:A.肽及球形蛋白質:100~1500;B. 葡聚糖(線性分子):100~1500,性狀:白色珠?;蚍勰?,屬親水性凝膠。性穩定,不溶于水、弱酸和堿溶液,遇強酸能使糖甘鍵分解。適用范圍:限于科研。
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中文名:葡聚糖凝膠 G-15
別名:交聯葡聚糖凝膠G-15、交聯右旋糖酐凝膠G-15
供應商:上海遠慕
規格:25G,100G,500G
PH:2~13
保存:RT
干顆粒直徑:40~120um
分子量分級范圍:A.肽及球形蛋白質:100~1500;B. 葡聚糖(線性分子):100~1500
床體積毫升/克干分子篩:2.5~3.5ml/g
性狀:白色珠?;蚍勰?,屬親水性凝膠。性穩定,不溶于水、弱酸和堿溶液,遇強酸能使糖甘鍵分解。
適用范圍:限于科研,實驗,不作臨床。
葡聚糖凝膠 G-15分離技巧:
1.分離時流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達;接餾分時可開全速,節省時間。
2.柱子盡可能長,葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。
3.餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。
4.洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。
5.鞣質成分死吸附嚴重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質
6.葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻參考。
7.填料反復使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來,待用。暫時不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長期不用時,可在以上處理基礎上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無醚味后,60~80°C干燥后保存。
葡聚糖凝膠 G-15物理性質:
1.化學穩定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩定的,在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應避免使用。
2.物理穩定性
葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯度。
葡聚糖凝膠 G-15操作流程:
1、乙醇浸泡:
在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇,濾干。
2、無鹽水浸泡:
室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹。
3、鹽酸浸泡:
在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗至中性。
4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層。
5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。
6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5: 1 即可。
7、洗脫方法:
可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。
8、在位清洗(CIP)
凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
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1.利用分子篩作用,進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定。
2.交聯葡聚糖的商品名為Sephndex,不同規格型號的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。
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